为什么要热灭活丨血清?加热可以灭活补体系统。焕活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,焕活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活丨血清。有必要做热灭活吗?实验显示,经过正确处理的热灭活丨血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,青岛新生牛血清生产商,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会明显的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,青岛新生牛血清生产商,青岛新生牛血清生产商,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。血清长时间储存在2-8℃时。青岛新生牛血清生产商
血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后,分离出的淡黄色透明液体(理论上)或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、各种生长因子、结合蛋白、促接触和生长因子,使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。其实,细胞培养从上个世纪开始发展至今,经历了多个阶段:1885年Roux生理盐水培育鸡胚组织;1903-1906年Jolly和Beebe等发明了悬滴培养;1907年Harrison培养蛙胚神经成功;1910、1912年Carrel完善了悬滴培养法;1923年Carral设计创立了卡氏瓶培养法;随后培养器具不断推陈出新,塑料瓶、皿、多孔培养板的使用逐渐普遍。在培养基方面也经历了巨大变革,天然培养基➡合成培养基鸡胚浸出液➡动物血清直至60年代出现无血清培养基。青岛新生牛血清购买注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。
为何血清会存在批间差?如何避免此影响?因为血清来源于动物,其组成成分有1000种左右,每个批号的组分和组分含量都是不固定的,因此批间差异是可能存在的。为了避免批间差异对细胞的影响,XP建议先进行批号测试,筛选合适的批号,备好库存(血清未开封时,在-20℃下可保存5年)。如需更换血清批次或产地,建议先试用后再大量订购。血清中沉淀是什么成分?造成原因有哪些?如何预防和处理沉淀?血清中沉淀主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘连蛋白,磷酸钙[1](显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。原因:造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活,反复冻融,长期储存于2-8℃或者室温。预防措施与建议:因此不立即使用的血清应保存在-20℃或以下。
放射免疫法以不同稀释度的抗血清与质量标记抗原混合,孵育24h后,测定其结合率。通常以结合率为50%的血清稀度和为效价。如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1:15000,则该血清的效价就是1:15000。抗血清的效价,除由抗血清本身的性质决定外,还受标记抗原的质量、孵育时间,所用稀释液的成分及其pH等因素的影响,在工作中必须引起注意。(2)双向扩散法利用大分子抗原和抗体在琼脂平板上扩散,两者在相交处产生沉淀线,以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。球脂板的制备:100mlpH7.1的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内,于水浴中加温搅拌,使琼脂完全溶解,趁热用纱布过滤,待溶液冷却到65°C左右时,加入叠氮钠(NaN3),使其在溶液中的浓度为0.1%。用移液管把琼脂放在干净平皿或玻片上,约3mm厚,待其冷却,完全凝固后,用打孔器打孔。中间孔内加适量抗原(容量为50ul)周围各孔内分别加入50ul1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀释的抗血清,37°下孵育24h,观察有无沉淀线产生,以判断血清的稀释度。血清分离质量的好坏,直接影响到监测结果,所以掌握畜禽的采集血分离血清的方法尤为重要。
血清的外观颜色说明每一个批次的血清外观颜色可能有所变化,它们的颜色可能是金黄色、红色、琥珀棕色或者是介于三者之间。保存血清比较好的方法我们建议将血清保存在-5℃至-20℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您将血清无菌分装至合适体积的灭菌容器内,再放回冷冻箱保存。如何解冻血清才不会使产品质量受损?我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱过夜融解,然后在室温下使之全融。必须注意的是,融解过程中需要规则地摇晃均匀。血清解冻后发现有絮状物出现,该如何处理?血清中絮状物的出现有许多种原因,比较普遍的原因是血清中脂蛋白的变性;血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,也是造成絮状物的主要原因之一。这些絮状物的产生不会影响血清本身的质量。若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g离心力短暂离心,再将离心后的上清液加入培养基内一起过滤。我们不建议您直接过滤血清以去除这些絮状物,因为它可能会阻塞过滤膜。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度,还需要根据细胞特性、实验目的做测试和调校。青岛新生牛血清培养基
碳水化合物,脂肪,生长因子,矿物质及微量元素。青岛新生牛血清生产商
血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?血清中沉淀物的出现有许多种原因,但比较普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。青岛新生牛血清生产商
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